藥物代謝·營養(yǎng)吸收·腸道通透性評價系統(tǒng)
——KingTech系列尤斯灌流系統(tǒng)(Ussing Chamber System)
【方法簡介】
20世紀(jì)50年代,丹麥學(xué)者Hans Ussing 將Ussing chamber(尤斯室或尤斯灌流室)介紹于世,該裝置模擬上皮組織在體內(nèi)的環(huán)境,并能長時間維持其活性;通過微電極檢測跨上皮電信號及其在藥物和營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)條件下的變化,來反映腸道藥物代謝、營養(yǎng)物質(zhì)吸收及通透性等的變化。伴隨著Ussing Chamber設(shè)計(jì)的不斷改進(jìn),其應(yīng)用也越來越廣泛。目前,幾乎所有的上皮都有利用Ussing Chamber研究的報道,包括消化道、呼吸道、生殖道、眼角膜、培養(yǎng)的單層上皮細(xì)胞等等。 研究的方向主要集中藥物吸收、營養(yǎng)吸收、腸道通透性、以及離子通道機(jī)制等。
【系統(tǒng)配置】
KingTech尤斯灌流系統(tǒng)主要由三個單元組成:
(1) 尤斯室(Ussing chamber):固定上皮組織并維持活性
(2) 電壓電流鉗:測量上皮組織電生理信號
(3) 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng):采集并記錄數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)過程時間較長,而且一般要做模型組與對照組的比較,所以多通道系統(tǒng)是比較好的選擇。通道越多,一次獲得的數(shù)據(jù)越多,實(shí)驗(yàn)成本也越低。而的系統(tǒng)為六通道。
KingTech(金泰公司)是專業(yè)和的尤斯系統(tǒng)制造商,其尤斯室品種涵蓋了所有可能的應(yīng)用,從zui初的電極前插式尤斯室(P2300),到可自動灌流和停留循環(huán)的雙模式尤斯室(C3300),再到式的電極豎插式尤斯室(C4300)。另外還有適合于低轉(zhuǎn)運(yùn)量的P2400尤斯室、用于分泌物滴定的P2300B尤斯室、以及于牛羊瘤胃上皮的C500尤斯室。其中的C4300電極豎插式尤斯室成為目前和的尤斯室。
【C4300電極豎插式尤斯室】
尤斯室是用來固定上皮組織并維持活性的裝置。它由兩個半室組成,中間插入固定組織的樣本夾。兩側(cè)半室裝有等量的、對稱的Ringer溶液,用于消除上皮兩側(cè)化學(xué)、機(jī)械及電性的驅(qū)動力。的C4300電極豎插式尤斯室是設(shè)計(jì)的產(chǎn)品,采用高透明亞克力材質(zhì)制作而成,電極豎插在小室中。
不同于老式的U型玻璃管尤斯室,也不同于普通的電極水平安裝的尤斯室,C4300具有以下優(yōu)點(diǎn):
? 體積小巧,結(jié)構(gòu)緊湊,大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)空間;
? 容積2-8ml,節(jié)省藥物用量;
? 電極在小室上方,電極填充液不會滲漏,電極中不會進(jìn)氣,鹽水也腐蝕不到電極接插件;
? 更換電極不需要先排空小室溶液。這種設(shè)計(jì)的好處是,既免除了繁瑣的操作,同時又避免組織長時間暴露在空氣中而降低存活時間;
【VCC MC6 Plus電壓電流鉗】
VCC MC6 Plus是六通道的電壓電流鉗,它包括六個獨(dú)立的電壓電流鉗模塊、一個內(nèi)置的脈沖發(fā)生器、以及一套中控開關(guān),并且附帶一個多檔位的標(biāo)準(zhǔn)信號模擬器。通過電極電纜與多通道尤斯室連接,可連續(xù)監(jiān)測組織的電壓、電流、電阻和電導(dǎo);而中控開關(guān)可以同時控制六個通道的操作。
VCC MC6 Plus是在原VCC MC6的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進(jìn)的,每個通道都有流阻補(bǔ)償?shù)牧砍绦o,對于不同面積的組織,不需要像VCC MC6那樣需要打開機(jī)箱調(diào)節(jié)量程。
【UCRS2.0數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)】
UCRS2.0數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)是專門設(shè)計(jì)用于多通道尤斯系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),包括DA1008采集器、UCRS2.0軟件以及數(shù)據(jù)電纜。DA1008采集器提供16位的分辨率和200K/s的采樣速率,通過USB線與計(jì)算機(jī)連接。UCRS2.0軟件提供譜圖曲線和原始數(shù)據(jù)表的實(shí)時記錄顯示,可通過DA1008采集器控制多通道電壓電流鉗的按鍵,并有脈沖開關(guān)功能。
UCRS2.0數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)與VCC MC6 Plus電壓電流鉗連接,可同時采集多達(dá)八個通道的尤斯室組織信號。
【應(yīng)用領(lǐng)域】
1、藥物代謝的研究:例如,藥物經(jīng)腸道的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制、藥物經(jīng)皮膚的吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。
2、胃腸道異常功能的研究,例如,正常的胃腸道黏膜組織、非正常的胃腸道黏膜組織,如缺血缺氧、炎癥反應(yīng)、營養(yǎng)障礙等微生態(tài)環(huán)境改變時導(dǎo)致的胃腸道屏障功能的變化。
3、營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理研究:葡萄糖、小肽、游離脂肪酸、氨基酸和礦物質(zhì)元素等物質(zhì)吸收轉(zhuǎn)運(yùn)效率的研究。
4、用于其他上皮組織的吸收:
? 腎小管內(nèi)皮細(xì)胞對營養(yǎng)物質(zhì)或藥物的排泌功能研究。
? 皮膚上皮細(xì)胞對營養(yǎng)物質(zhì)或藥物的吸收機(jī)能的研究。
? 其他上皮組織,如大鼠結(jié)腸、小鼠回腸、青蛙皮膚、氣道上皮、視網(wǎng)膜上皮、膀胱壁、支氣管粘膜等。
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