前一階段花費了不少時間,來摸索體外BBB的構(gòu)建方法,試了三種Transwell板,試用了2-3臺細胞電阻儀,也換了不同課題組的細胞,功夫不負有心人,終于構(gòu)建成功拿到了理想結(jié)果。 當初在摸索階段從小紅書上也獲得很多靈感,也感激給予幫助不吝賜教的朋友們,因此借總結(jié)一些經(jīng)驗,分享出來,希望友友們少走彎路。
1、細胞狀態(tài)很重要!一定要等到細胞狀態(tài)良好時再種板,上室小孔膜上鋪5W個細胞,種板要均勻,上室100-200μL完培,下室600-800μL完培。
2、不要污染!由于種Transwell板比較復雜,工序多,要時刻注意消毒。種完板后,不用一直鏡下觀察;使用電阻儀檢測室,更要注意不要污染。
3、 選擇合適的Transwell板,確定自己需要多少孔的孔板,從而知道種多少個細胞。如果需要鏡下觀察細胞狀態(tài)的話,要用PET膜(透明的)。我當初試了甄選/康寧/潔特的,最后選了潔特的孔板。
4、選擇穩(wěn)定好用的細胞電阻儀?。。∵@個是重中之重,比如密理博的電阻儀,是筷子電極,手持式的話容易抖,導致數(shù)值不穩(wěn)。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀,可以平穩(wěn)放在孔板上,檢測的時候數(shù)值超級穩(wěn)定。
5、關(guān)于BBB形成時間,每次構(gòu)建BBB的時長都要根據(jù)細胞狀態(tài)而異,要確保單層細胞形成(細胞電阻達到穩(wěn)定平臺期),再進行下一步實驗。
文章引用出處:體外血腦屏障模型構(gòu)建-大功已成 - 小紅書 (xiaohongshu.com)
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